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1 클로닝이란? 1

1.1  클로닝의 정의 2

1.2  새로운 유전자의 발굴 3

1.3  과거의 클로닝 5

1.4  현재의 클로닝 6

2 클로닝을 위한 준비 9

2.1  클로닝 설계에 유용한 소프트웨어 10

2.2  벡터, 플라스미드, 컨스트럭트 & 코작 염기서열(Kozak consensus sequence) 13

2.3  MCS(Multiple Cloning Site) 18

2.4  제한효소(Restriction Enzyme, RE)와 스타활성(star activity) 22

2.5  아가로즈 젤 전기영동을 이용한 DNA 분석 29

2.6  LB(Luria-Bertani) 플레이트 만들기 34

2.7  Competent Cell 37

2.8  DNA의 질량을 mole 수로 바꾸는 법 41

2.9  새로운 플라스미드를 받았을 때 42

2.10  cDNA 라이브러리 44

3 클로닝 첫걸음 47

3.1  Cut & Paste 48

3.2  DNA 염기서열분석 & direct 염기서열분석 61

3.3  클로닝을 위한 PCR & nested PCR 65

3.4  Fill-in(Full & Partial) 77

3.5  상보적인 점착말단(Compatible Cohesive End) 83

3.6  메틸화(Methylation) 85

3.7  세 절편 연결(Three-piece ligation) 93

3.8  위치지정 돌연변이(Site-directed mutagenesis) 96

3.9  TA 클로닝 & T-벡터의 제작 102

3.10  TOPO TA 클로닝 108

3.11  Gateway 클로닝 110

3.12  식물 형질전환(Plant transformation) 벡터의 구조 114

3.13  Rhizobium radiobacter 형질전환 117

4 클로닝 다음 걸음 119

4.1  유전자 중간 부분에 다른 DNA를 삽입(insertion)하는 방법 120

4.2  유전자 중간 부분을 삭제(deletion)하는 방법 124

4.3  유전자에 에피톱 택을 삽입하는 방법 & CRISPR/Cas9 126

4.4  번역융합(Translational Fusion) vs 전사융합(Transcriptional Fusion) 133

5 클로닝으로 인한 두통을 덜어주는 방법 135

5.1  Golden gate assembly & Golden gate를 이용해 푸는 직소퍼즐 136

5.2  In-Fusion SLIC(In-Fusion Sequence-and Ligation-Independent Cloning) 142

5.3 ‌ T4 DNA Pol SLIC

(T4 DNA Polymerase Sequence-and Ligation-Independent Cloning) 153

5.4  RE-free SLIC 159

5.5  EMP(Exponential Megapriming PCR) 클로닝 161

5.6  MRF(Modified Restriction Free) 클로닝 165

5.7  Non-template PCR 클로닝 168

5.8  cDNA 합성 의뢰 171

6 클로닝 마지막 걸음 173

6.1  다른 종에서 유사한 유전자(homolog)를 클로닝하는 방법 174

6.2  RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends) 178

6.3  BAC 재조합 181

6.4  Old Trick: 부분절단 185

6.5  벡터의 변경 187

6.6  클로닝이 다 됐다고 생각했는데 틀이동 돌연변이가 있을 때 191

6.7  클로닝의 실제: 억세게 운이 없는 경우 193

7 클로너에게 주는 조언 205

7.1  클로닝이 안 될 때 206

7.2  클로닝의 정리와 기록 209

심화학습을 위한 문헌 213

약자 215

찾아보기 217

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